羊水細胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)制備方法

    羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型。目前國內外大都采用腹腔羊膜穿刺術，妊娠12-30周的羊水細胞均可培養(yǎng)基成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析，*孕周為16周左右。因此時羊水增長快，羊水中細胞較多，細胞培養(yǎng)易于生長，而且不易損傷胎兒。國內多數(shù)選擇的穿刺時間在妊娠的第16-30周。國外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時間大致計算（1ml/w）。資料表明，穿刺病例的妊娠結局、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯差異。

　　（1）采樣：選擇妊娠13-14周婦女，在無菌條件下抽取羊水5ml，立即注入無菌離心管中；

　　（2）收集：離心分離細胞，1000rpm10分鐘，去上清，留0.5ml，輕打混勻；

　　（3）接種：30mm培養(yǎng)基皿中放蓋玻片1張，每片滴混勻的細胞液1-2滴，置培養(yǎng)箱內培養(yǎng)30-60分鐘；

　　（4）培養(yǎng)：取出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml，靜置培養(yǎng)48小時后觀察細胞生殖狀況并定時換液，5-10天后，可見大量成纖維細胞或上皮樣細胞生長；

　　（5）終止培養(yǎng)：當有大量圓形發(fā)亮細胞出現(xiàn)時，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml，作用10-12小時；

　　（6）低滲：倒掉培養(yǎng)液，加預溫37℃0.075MKCL溶液5ml，37℃溫育30分鐘，鏡下可見脹大的羊水細胞，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液預固定；

　　（7）固定：倒掉低滲液，加5ml固定液固定30分鐘以上，反復3次；

　　（8）干燥：將附有細胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)基皿中，置80℃烤箱處理2-3小時；

　　（9）膠片：將附有細胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上，正面朝外，小心細胞破壞。