緩沖液

免疫細(xì)胞化學(xué)中應(yīng)用的緩沖液種類較多，即使是同種緩沖液，其濃度、pH、離子強(qiáng)度等也常不同。在此介紹幾種zui常用緩沖液的配制。

1、0.2mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer，PB）

試劑： NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O。

配制方法：配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的NaH2PO4；稱取NaH2PO4·2H2O 31.2 g 或NaH2PO4·H2O 27.6g加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的Na2HPO4：稱取Na2HPO4·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O，充分混合即為0.2mol/L的PB（pH約為7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。

2、0.01mol/L磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

試劑：0.2 mol/L PB　　　    50ml

   NaCl 　　　　　　　8.5～9g（約0.15mol/L）

   　重蒸水 　　　　　　至1000ml

配制方法：稱取NaCl8.5～9g及0.2mol/L的PB50ml，加入1000ml的容量瓶中，zui后加重蒸水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配制0.02mol/L的PBS，則PB量加倍即可，依此類推。

PB和PBS是免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)中zui為常用的緩沖液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.25～7.35之間，否則需要調(diào)整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，常可達(dá)到要求的pH值，若需調(diào)整pH，通常也是調(diào)PB的pH。

3、Karasson–Schwlt's磷酸鹽緩沖液

試劑：  NaH2PO4·H2O            3.31g

     Na2HPO4·7H2O           33.77g

     　　重蒸水 　　　　　　　至1000ml

配制方法：同前。該緩沖液主要用于配制Zamboni's固定液。

4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl緩沖液。

試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷)　　60.57g

   　1 N HCl　　　　　　　　　約420ml

   　重蒸水 　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6，zui后加重蒸水至1000ml。此液為儲備液，于4℃冰箱中保存。免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，用時(shí)取儲備液稀釋10倍即可。

該液主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。

5、Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）

試劑：0.5mol/L Tris-HCl緩沖液　　　100ml

   　NaCl　　　　　　　　　　　3.5～9g（0.15mol/L）

  重蒸水　　　　　　　　　　　至1000ml

配制：先以重蒸水少許溶解NaCl，再加Tris-HCl緩沖液，zui后加重蒸水至1000ml，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。

TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。

6、Tris-TBS（TBS）

試劑：Triton X-100　　　　　　         　10ml（1%）或3ml（0.3%）

  　 0.5mol/L Tris緩沖液（pH7.6）　　1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB）

    　NaCl　　　　　　　　　　　　　8.5～9g

    重蒸水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先以重蒸水少許溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris緩沖液或（PB），zui后加重蒸水至1000ml，充分搖勻。

該液常用濃度為1%及0.3%，前者主要用于漂洗標(biāo)本，后者主要用于稀釋血清。細(xì)胞

7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸緩沖液

試劑：0.2mol/L二甲胂酸鈉　　　　　　500ml

    　0.1N HCl　　　　　　　　　　　28ml

   蒸餾水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl1.7ml加蒸餾水至1000ml，配成0.1N，zui后取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500ml及0.1N HCl28ml混合，加蒸餾水至1000ml，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。