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          細胞制備流程及轉化方法
          更新時間:2016-08-05   點擊次數:3377次

          細胞制備流程及轉化方法
          1. 轉移0.2-1ml培養物至裝有500ml LB(或其他營養豐富的培養基)的1-2升搖瓶

          2. 37°C下劇烈振蕩培養2-6小時

          3. 定時監控OD600值(培養1小時后每半小時測定一次)

          4。 當OD600值達到0.5-1.0時,從搖床中取出搖瓶,置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養液數小時)

          5. 細胞在4°C 5000g下離心15分鐘,棄上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)

          6. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細胞于少量體積中(幾毫升),然后加水稀釋至離心管的2/3體積。

          7. 照上面步驟重復離心,小心棄去上清液

          8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞

          9. 離心,棄上清液

          10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細胞

          11. 照上面步驟離心,小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)

          12. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體積為2-3ml

          13. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管,于-80°C保存

           

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