果膠甲酯化程度測試盒

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果膠甲酯化程度測試盒測定意義

植物細胞壁中的果膠是植物初生細胞壁的主要成分，除了起結構支撐、物質運輸等作用外，還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細胞壁的堅韌程度及其抗性。

測定原理

果膠甲酯鍵經皂化處理后釋放出甲醇，甲醇與2,4-戊二酮反應顯色，在412nm下測定吸光值；同時半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲?；?2-呋喃甲酸與3,5-二甲基ben酚反應產生有色物質，在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、酶標儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務必在30min內測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A標準管。顯色后務必在30min內測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務必在30min內測完。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

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